O cultivo de linhagens celulares in vitro é uma ferramenta amplamente utilizada em pesquisa.
Entretanto, a capacidade de manter células em cultura por tempos longos abre uma discussão em relação às práticas de sub-cultivo e à qualidade de dados científicos gerados. Uma preocupação que vem sendo levantada é quanto ao número de passagens, ou seja, o número de vezes que uma população de células foi removida de um frasco de cultura para sub-cultivo.
Linhagens celulares com um número alto de passagens, podem sofrer alterações na morfologia, no desenvolvimento, na proliferação, na expressão gênica, na eficiência de transfecção, dentre outros numerosos efeitos. Portanto, limitar o número de passagens de uma linhagem celular é um passo importante para garantir resultados confiáveis e reprodutíveis.
Então, qual seria um número alto de passagens para linhagem celular ATCC? Vejamos abaixo.
Esta é uma pergunta complexa que não possui uma resposta certa. Uma revisão da literatura sobre o impacto do número de passagens em linhagens celulares mostra que os efeitos são complexos e dependentes de numerosos fatores, como o tipo da linhagem celular ATCC, o tecido e espécie de origem, as condições da cultura e a aplicação para a qual as células são utilizadas.
Além disso, um número de passagem considerado “alto” para uma linhagem celular pode não provocar efeitos significantes em outras linhagens. Portanto, a restrição do valor máximo de passagens usado para uma dada linhagem celular ATCC em um determinado experimento é importante a fim de evitar a variabilidade proveniente de efeitos relacionados ao número de passagens.
Quando falamos em linhagem celular, os erros mais comuns no controle de passagens de células ATCC incluem não registrar corretamente o número de passagens, utilizar células em passagens muito altas sem avaliar alterações morfológicas, misturar linhagens sem rastreabilidade, e subcultivar de forma irregular (deixando as células ultrapassarem a confluência ideal).
Outro erro frequente é não congelar estoques em passagens baixas, o que compromete a padronização e a reprodutibilidade dos experimentos.
Para evitar esses problemas, a ATCC recomenda manter planilhas de controle atualizadas, seguir protocolos específicos de cada linhagem e sempre retornar ao estoque original após cerca de 10 a 20 passagens.
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Passagens sucessivas podem favorecer alterações fenotípicas e genéticas, dependendo da linhagem, condições de cultivo e tempo em cultura. Por isso, o histórico de passagens deve ser controlado entre os experimentos.
Pode influenciar. Cultivo prolongado e subcultivos sucessivos podem estar associados a alterações na expressão gênica, tornando o controle de passagem relevante para estudos moleculares.
Sim. Alterações fisiológicas associadas ao histórico de cultivo podem modificar a resposta das células à transfecção. Recomenda-se padronizar a passagem entre experimentos comparáveis.
Subcultivos realizados em diferentes níveis de confluência podem alterar o estado fisiológico da cultura. Manter condições de subcultivo consistentes ajuda a reduzir a variabilidade experimental.
O registro permite estabelecer um histórico rastreável desde o descongelamento do estoque e facilita a comparação entre experimentos realizados em diferentes momentos.
cultura de bactérias para identificação e sua função
