Para explorar essas possibilidades, pesquisadores da Università degli Studi di Milano na Itália investigaram a presença e atividade de SARS-CoV-2 em tecidos do coração de seis pacientes que vieram à óbito devido à COVID-19. O vírus foi detectado em cardiomiócitos utilizando diferentes metodologias, dentre elas PCR digital, Western blot, imunohistoquímica e microscopia eletrônica de transmissão. Além disso, ensaios de hibridização in situ demonstraram transcrição viral ativa através da detecção do RNA de SARS-CoV-2 utilizando uma sonda sense V-nCoV-2019-S.
Neste trabalho, os pesquisadores utilizaram o ensaio de hibridização in situ da Advanced Cell Diagnostics (ACD) que utiliza a tecnologia inovadora e patenteada RNAScopeTM. O ensaio faz uso de duas sondas independentes que precisam hibridizar à sequência alvo em tandem para que a amplificação do sinal ocorra. Uma vez que é improvável que duas sondas independentes hibridizem uma ao lado da outra em um alvo não-específico, este desenho de sondas garante amplificação seletiva dos sinais específicos. Além disso, o uso de várias sondas para um RNA alvo e as várias etapas de amplificação do sinal possibilitam uma sensibilidade superior de tal modo que uma única molécula de RNA pode ser visualizada como um ponto.
A ACD oferece três tipos de ensaios: RNAScope, BaseScope e miRNAscope. Enquanto o RNAscope possibilita a visualização de RNAs mensageiros e não-codificantes, o BaseScope permite a detecção específica de junções de éxons, variantes de splicing e mutações pontuais.
Já o miRNAscope foi desenvolvido para avaliar pequenos RNAs, como oligonucletídeos antisense (ASO), microRNAs (miRNAs) e RNAs de intereferência pequenos (siRNAs). Ademais, a tecnologia RNAScopeTM pode ser combinada à imunohistoquímica (IHC) na mesma lâmina para detecção de RNA e proteína simultaneamente.
Fonte: Bulfamante, G. P.; Perrucci, G. L.; Falleni, M.; Sommariva, E.; et al. (2020) Evidence of SARS-CoV-2 transcriptional activity in cardiomyocytes of COVID-19 patients without clinical signs of cardiac involvement. Biomedicines, 8, 626; doi:10.3390/biomedicines8120626
