O Western blotting tradicional é um dos ensaios mais amplamente utilizados para análises de proteínas. Entretanto, é uma técnica que demanda tempo, consiste em numerosas etapas, além de apresentar alguns desafios que podem impactar a reprodutibilidade dos experimentos. Desde seu desenvolvimento, em 1979, sofreu pouquíssimas mudanças.
O sistema WESTM da Protein Simple veio para revolucionar o campo de análise de proteínas. De maneira automatizada, o instrumento preenche os capilares com uma matriz de separação e de empacotamento (stacking), similares aos géis tradicionais de poliacrilamida. Em seguida, as amostras passam por essa matriz através da aplicação de campo elétrico, onde ocorre a separação das diferentes proteínas por peso molecular ou carga. As proteínas são, então, imobilizadas na parede dos capilares através de uma tecnologia própria da Protein Simple.
Finalmente, a imunomarcação ocorre através da incubação e lavagem dos capilares com anticorpos primários e secundários conjugados a peroxidase. O sinal quimioluminescente é quantificado por múltiplos tempos de exposição e analisado automaticamente pelo software Compass. Os dados podem ser visualizados em uma imagem de blot virtual ou em um eletroferograma.
Todas as etapas de separação, bloqueio, incubação com anticorpos, lavagens, detecção e até mesmo as análises são automatizadas. Você só precisará pipetar suas amostras e o anticorpo primário em uma placa específica. Posicione o cartucho capilar e a placa no instrumento, pressione o botão Iniciar e, em apenas 3 horas, receba seus dados quantificados.
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